在細胞培養(yǎng)的日常工作中，我們時常會遇到一些顯而易見的污染，比如細菌或真菌。但還有一種更為隱蔽的污染源——支原體，它難以察覺，卻可能對細胞狀態(tài)和研究結(jié)果產(chǎn)生深遠影響。

一、支原體：一個難以察覺的挑戰(zhàn)

支原體是目前已知能獨立生存的最小微生物之一。它顯著的特點是缺乏細胞壁，這一特性帶來兩個直接后果：首先，它能夠輕易穿過常規(guī)的0.22μm濾膜，導(dǎo)致滅菌過濾失效；其次，針對細胞壁合成的抗生素（如青霉素）對它無效。

更棘手的是，支原體污染在早期通常不會引起培養(yǎng)液渾濁或細胞快速死亡等明顯變化，這使得它能在不知不覺中持續(xù)影響培養(yǎng)體系。

二、污染如何發(fā)生及潛在影響

支原體污染的來源多樣，主要可能通過實驗操作人員、污染的細胞系或培養(yǎng)試劑（尤其是血清）引入。一旦發(fā)生，它雖不立即殺死細胞，但會通過多種方式干擾實驗：

· 改變細胞代謝和生長狀態(tài)，可能導(dǎo)致增殖放緩或形態(tài)改變。

· 消耗培養(yǎng)液中的關(guān)鍵營養(yǎng)物質(zhì)，同時分泌代謝產(chǎn)物影響細胞功能。

· 在共培養(yǎng)中干擾細胞間的相互作用，可能影響信號通路研究。

· 對細胞基因組穩(wěn)定性構(gòu)成潛在威脅。

這些影響會直接降低實驗數(shù)據(jù)的可靠性和可重復(fù)性。

三、識別與確認(rèn)污染的方法

由于缺乏肉眼可見的跡象，依賴專業(yè)檢測手段至關(guān)重要：

1. PCR法：目前常用、快捷的方法，靈敏度高，可快速檢測多種常見支原體。

2. 熒光染色法：使用特異性染料，在熒光顯微鏡下可觀察到附著在細胞表面或散落在細胞周圍的支原體DNA。

3. 培養(yǎng)法：將待測樣本接種于專用支原體肉湯培養(yǎng)基，觀察變化。此法耗時較長，但作為經(jīng)典方法仍有其價值。

4. 專業(yè)檢測服務(wù)：許多生物公司提供快捷、靈敏的檢測服務(wù)，適合定期篩查。

四、應(yīng)對與預(yù)防策略

一旦確認(rèn)污染，情況往往比較棘手。常見的處理方式包括：

· 使用專用試劑：如市場上的支原體清除試劑，但需注意其對細胞可能產(chǎn)生的壓力。

· 果斷放棄：對于珍貴程度不高的細胞系，最穩(wěn)妥的方式是及時廢棄，并對環(huán)境進行清潔，防止擴散。

相比之下，預(yù)防是遠勝于治療的理想策略：

· 規(guī)范操作：嚴(yán)格執(zhí)行無菌操作規(guī)程，是所有預(yù)防工作的基礎(chǔ)。

· 來源控制：對新引入的細胞系進行嚴(yán)格的入庫檢測，確保來源清晰可靠。

· 定期篩查：建議對所有正在培養(yǎng)的細胞系，每1-3個月進行一次常規(guī)支原體檢測。

· 合理管理：將不同細胞系分開操作，避免交叉污染。

· 試劑選擇：選用質(zhì)量有保障的培養(yǎng)試劑。